Effect of oleic, linoleic and palmitic acids on cellular proliferation and alpha-enolase and FBP (Far upstream element-binding protein)expression in murine fibroblasts: possible application on healing process

• Grant number: 09/03488-9
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Master
• Start date: August 01, 2009
• End date: July 31, 2011
• Field of knowledge: Biological Sciences - Pharmacology - Biochemical and Molecular Pharmacology
• Principal Investigator: Rui Curi
• Grantee: Juliana Magdalon
• Host Institution: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brazil

Abstract

Fibroblastos são protagonistas da fase de proliferação e de deposição da matriz extracelular no processo de cicatrização de feridas. Agem através da liberação de fatores responsáveis pela fibroplasia, deposição de matriz extracelular e angiogênese. Em estudos do grupo (in vivo e in vitro) foi observado que os ácidos graxos afetam as fases inflamatórias e de remodelamento do tecido sendo potencializadores do processo de reparo tecidual. Recentemente, verificamos que os ácidos oleico, linoleico e g-linolênico estimulam a produção de espécies reativas de oxigênio em fibroblastos. Adicionalmente, estudos preliminares in vitro indicam uma possível modulação dos fibroblastos pelos ácidos oleico, linoleico e palmítico na expressão de proteínas (IL-6, TNF-a, PPAR-b) e na proliferação celular. In vivo, o tratamento de feridas com ácidos graxos diminui a camada de células necrosadas ao redor do ferimento e aumenta a expressão local de VEGF-a e PPAR-b. Realizamos a análise proteômica por eletroforese em gel bidimensional de proteínas moduladas em fibroblastos tratados com os ácidos oleico, linoleico e palmítico. Dentre as proteínas identificadas, a ±-enolase e a Far upstream element binding protein 1 (FBP1) estão diretamente envolvidas no processo de cicatrização, atuando na migração e proliferação dos fibroblastos e no remodelamento do tecido. A a-enolase participa formando plasmina e degradando componentes da matriz extracelular. A FBP modula a expressão de c-myc, estando envolvida na proliferação de células. Neste sentido, estudaremos o efeito do tratamento de fibroblastos murinos com os ácidos oleico, linoleico e palmítico na proliferação celular e expressão de a-enolase e FBP; verificaremos o mecanismo de sinalização envolvido, correlacionando-o ao processo de cicatrização, principalmente em relação à síntese e degradação de colágeno. Os ensaios de proliferação celular serão realizados pelas técnicas de incorporação de timidina e curva de crescimento. A expressão de a-enolase, FBP e c-myc será verificada por Western Blot e qPCR. A análise da expressão de ±-enolase na superfície celular será realizada por citometria de fluxo e a atividade de plasmina e degradação de colágeno por espectrofotometria e contagem de radioatividade, respectivamente. Também será analisada a contração de uma matriz de colágeno. A realização do presente estudo pode levar à utilização de ácidos graxos como alvo terapêutico no processo de cicatrização.

Academic Publications

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MAGDALON, Juliana. Effects of treatment with oleic or linoleic acids in vitro or in vivo on the production of inflammatory mediators by macrophages.. 2011. Master's Dissertation - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.