CARACTERIZATION OF IRS1/Akt/mTOR PATHWAY ON TUMOR XENOGRAFTS OF MICE FED HYPERPROTEIN DIET

• Grant number: 10/17944-3
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Doctorate
• Start date: March 01, 2011
• End date: October 31, 2013
• Field of knowledge: Health Sciences - Medicine - Medical Clinics
• Principal Investigator: José Barreto Campello Carvalheira
• Grantee: Maria Carolina Santos Mendes
• Host Institution: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brazil
• Associated research grant: 08/57952-5 - National Institute of Obesity and Diabetes, AP.TEM

Abstract

O câncer e a terapia oncológica estão associados com um progressivo desgaste físico e má nutrição. Nesse sentido, a oferta de uma dieta hiperprotéica é indicada a fim de se satisfazer à necessidade de síntese protéica e minimizar a degradação protéica. Contudo, é escasso o número de trabalhos na literatura que indiquem a ação da dieta hiperprotéica na estimulação do crescimento tumoral. É sabido que a ativação constitutiva das proteínas da via IRS/PI3K/Akt é um fenômeno comum em vários tumores humanos. Nos últimos anos, a atenção do meio científico foi direcionada para um diferente ramo da via IRS/PI3K/Akt, na qual figura a mTOR (mammalian target of rapamycin). A via da mTOR tem um papel fundamental no controle das funções celulares, incluindo síntese protéica, crescimento e proliferação celular. Essa via é estimulada por fatores de crescimento, dentre estes os aminoácidos. A leucina é o aminoácido de maior potência na ativação da mTOR. Sendo assim, o objetivo deste estudo é investigar os efeitos da dieta hiperprotéica, e em especial da leucina, na modulação do crescimento tumoral em diferentes linhagens de células tumorais, que se diferenciem em relação a ativação constitutiva da via IRS1/Akt/mTOR. Para tanto, serão utilizados camundongos machos da linhagem SCID provenientes do biotério central da Unicamp. Estes serão inoculados com 1x106 células de linhagem tumoral específica (PC3, HT29 ou A549) na região subcutânea dorsal. Estes animais serão divididos em 4 grupos e receberão dieta controle, hiperprotéica, suplementada com leucina e hiperprotéica reduzida em leucina. Cada grupo conterá no mínimo 5 animais, sendo que estes serão identificados e acompanhados individualmente durante todo o experimento. O peso e o crescimento tumoral serão avaliados diariamente, começando a partir da data da inoculação do tumor. Ao final, o camundongo será pesado e sacrificado, e os tumores serão extraídos para análise. Imunoprecipitação e immunoblotting serão utilizados para examinar a expressão das proteínas chaves da via IRS/Akt/mTOR. Imunohistoquímica será realizada para avaliar proliferação e apoptose nos tecidos tumorais. Além disso, a viabilidade celular (através do ensaio de MTT), proliferação (CFSE) e morte celular (Anexina e Pi) serão avaliadas em cultura celular (células PC-3, HT-29 e A549) após exposição a diferentes concentrações de leucina.

Academic Publications

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MENDES, Maria Carolina Santos. Characterization of IRS1/AKT/mTOR pathway in tumor xenografts of animals supplemented with leucine. 2014. Doctoral Thesis - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas Campinas, SP.