Functional analysis of miRNAs and gene and protein expression

• Grant number: 20/03784-6
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training
• Start date: April 01, 2020
• End date: October 31, 2020
• Field of knowledge: Biological Sciences - Genetics - Human and Medical Genetics
• Principal Investigator: Erika Cristina Pavarino
• Grantee: Fabiana de Campos Gomes
• Host Institution: Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP). São José do Rio Preto , SP, Brazil
• Associated research grant: 18/09126-0 - Inflammatory markers in Down Syndrome: gene expression and functional analysis, AP.R

Abstract

O sistema imune intrinsecamente deficiente na síndrome de Down (SD) possivelmente contribui para a suscetibilidade aumentada de infecções relacionadas às principais causas de internação e óbito desses indivíduos e também parece favorecer processos neurodegenerativos como a Doença de Alzheimer. A trissomia do cromossomo 21 pode causar mudanças globais na expressão de genes, inclusive daqueles não localizados no cromossomo 21, que regulam processos imunológicos/inflamatórios e outros processos fisiológicos. Objetivos: Esta presente proposta visa investigar se indivíduos com SD apresentam um padrão diferencial de expressão de microRNAs e de genes relacionados ao sistema imunológico/inflamatório em comparação aos indivíduos sem a síndrome e realizar a análise funcional, em células mononucleadas de sangue periférico (PMBCs) de indivíduos com SD, para validar a associação observada in silico entre os genes e os microRNAs estudados. Metodologia: As amostras serão submetidas à extração de RNA, a análise de expressão dos genes e dos MicroRNAs será realizada pela técnica de PCR quantitativa (PCRq), posteriormente será realizada a quantificação das proteínas por Western Blot. Os dados resultantes da análise de expressão dos RNAs e das proteínas serão comparados entre os grupos de indivíduos com SD e sem a síndrome. A avaliação da interação dos MicroRNAs e dos genes serão realizadas por ensaio da luciferase e análise funcional por transfecção. Resultados esperados: Espera-se que o presente estudo possa contribuir para identificação de um padrão diferencial de expressão dos miRNAs hsa-miR-378a-3p, hsa-miR-942-5p e hsa-miR-668-3p e dos genes CCR7, IKBKB e PLA2G2D, relacionados ao sistema imunológico/inflamatório, em crianças com síndrome de Down em comparação aos indivíduos sem a síndrome, e identificar a interação in vitro entre os miRNAs hsa-miR-378a-3p, hsa-miR-942-5p e hsa-miR-668-3p e os genes CCR7, IKBKB e PLA2G2D, respectivamente.