| Grant number: | 23/06938-2 |
| Support Opportunities: | Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training |
| Start date: | July 01, 2023 |
| End date: | October 31, 2024 |
| Field of knowledge: | Biological Sciences - Biophysics - Cellular Biophysics |
| Principal Investigator: | Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva |
| Grantee: | Isadora Carolina Betim Pavan |
| Host Institution: | Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brazil |
| Associated research grant: | 18/13739-8 - Molecular chaperone HSP70 mediates proteostasis in endothelial cells response to hemodynamic force, AP.JP |
Abstract O grupo observou que o shear stress (SS) patológico reduz a expressão da HSP70 na célula endotelial (EC) da veia umbilical humana (HUVEC), aorta, na EC da artéria pulmonar (HPAEC) de pacientes com hipertensão pulmonar tromboembólicacrônica (CTEPH) e in vivo. Além disso, mostramos que a HSP70 é essencial para migração e angiogênese das ECs de diferentes berços vasculares. No entanto, no contexto de SS a redução dos níveis proteico da HSP70 é responsável pelo fenótipo da EC observado no SS patológico não é definida, além dos seus clientes específicos neste contexto. Os objetivos do presente TT5 são: (1) padronização da técnica de marcaçãocom aminoácido biortogonal (BONCAT/ bioorthogonal non-canonical amino-acid tagging) no SS, (2) padronização da imunoprecipitação (IP) da HSP70 endógena e avaliação do perfil proteico das protéinas clientes recém sintetizadas associadas -marcadas com homoziadoalanina (AHA) da técnica de BONCAT - sendo revelado o perfil de peso molecular das proteínas marcadas e (3) do acoplamento de BONCAT com ensaio de ligação por proximidade (PLA) que permitirá validar a interação da HSP70 com este pool de proteína recém sintetizado por confocal. Durante o JP foi descoberto que a perda de função da HSP70 inibe o alinhamento das EC no sentido fluxo, indicando papel da HSP70 na mecanotransdução das ECs. No entanto, é necessário ter os métodos acimas estabelecidos para avançarmos na identificação de quais proteínas clientes da HSP70 são afetados. Além de utilizar inibição farmacológica da HSP70 na busca dos clientes. | |
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