Purification of lipases using the reversed micelles system.

• Grant number: 10/06982-1
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Scientific Initiation
• Start date: June 01, 2010
• End date: December 31, 2010
• Field of knowledge: Biological Sciences - Biochemistry - Biochemistry of Microorganisms
• Principal Investigator: Valéria Marta Gomes de Lima
• Grantee: Daniele Longo Machado
• Host Institution: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brazil

Abstract

Lipases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações éster, em meio aquoso, ou reações sintéticas, quando em ambientes aquo-restritos, o que as tornam interessantes para aplicações em diferentes segmentos industriais. Um exemplo disso é o interesse em sua utilização para tratamento de efluentes e na recuperação de áreas poluídas, pois quando a lipase é utilizada para isso, os produtos de sua reação causam menos poluição do que reações químicas convencionais. Entretanto, existem alguns fatores limitantes como: instabilidade enzimática, dificuldade de recuperação da enzima após a catálise, e alto custo relacionado à purificação da lipase, realizada principalmente por métodos cromatográficos. Além disso, muitas lipases, devido ao seu forte caráter hidrofóbico, tendem a formar agregados de alta massa molecular, o que dificulta a purificação por métodos tradicionais e obriga à adição de tensoativos ou solventes para rompimento do agregado, elevando os custos. Devido a esses fatores, os sistemas de micelas reversas têm sido estudados tanto para purificação de lipases por extração líquido-líquido, quanto como meio reacional para aplicação dessas enzimas em biocatálise. Micelas reversas consistem de ambientes micro-aquosos, compostos de solvente orgânico, surfactante e água. Este sistema possui uma variedade de vantagens: permite a solubilização tanto de substratos e produtos hidrofílicos quanto hidrofóbicos; evita o contato direto da proteína com o solvente orgânico, possibilita o uso de temperaturas mais elevadas; é uma solução isotópica; é uma técnica com grau de dificuldade menor e com custo reduzido, em relação às técnicas cromatográficas tradicionais. O presente projeto pretende estudar os parâmetros de purificação das lipases produzidas por um fungo filamentoso isolado da Mata Atlântica, utilizando o sistema de micelas reversas. Para tanto, após o cultivo do microrganismo em fermentação submersa, serão estudados parâmetros de extração da enzima para o meio micelar, como o efeito do pH e da concentração do surfactante, bem como fatores relacionados à re-extração da enzima, como o efeito da força iônica da solução aquosa extratora e da adição de solventes orgânicos polares.