Caracterização bioquímica e avaliação in vitro da ativação de fibroblastos e do potencial leishmanicida de uma L-aminoácido oxidase (LAAO) da peçonha de Crotalus durissus terrificus

Resumo

Os acidentes ofídicos representam um sério problema de saúde pública nos países tropicais. No Brasil, a grande maioria dos acidentes notificados é causada pela família Viperidae, sendo o gênero Crotalus responsável pela maior letalidade entre os acidentes. As peçonhas de serpentes são misturas complexas de proteínas, peptídeos e compostos orgânicos e minerais que afetam uma enorme variedade de processos biológicos. A L-aminoácido oxidase (LAAO) é uma enzima presente nessas peçonhas que catalisa a oxidação de L-aminoácidos, produzindo ±-cetoácidos, amônia e peróxido de hidrogênio. Várias atividades funcionais de LAAOs foram relatadas e têm demonstrado um atrativo para a área da biotecnologia. Entre essas, podem ser citadas atividades antitumoral, antimicrobiana, atividade na coagulação sanguínea, anti-HIV, indutora de edema e também a modulação da atividade de células do sistema imune. É muito relatada também a ação de L-aminoácido oxidases contra parasitas do gênero Leishmania, incluindo L. braziliensis, L. amazonensis, L. donovani, entre outros. A Leishmaniose é considerada um problema de saúde pública e, atualmente, vem ganhando grande interesse, principalmente devido à expansão de viagens internacionais e ao crescimento da população. Na América do Sul é uma doença tropical endêmica e possui poucas abordagens terapêuticas. Assim, tendo em vista a ação das LAAOs sobre Leishmania spp, a importância da Leishmaniose para a saúde pública, e o potencial biotecnológico destas enzimas, pretende-se pioneiramente isolar e caracterizar uma LAAO presente na peçonha de C. d. terrificus, visando ampliar o conhecimento sobre o mecanismo de ação desta enzima, a sua relevância na resposta imunológica observada no envenenamento e, principalmente, sua possível aplicação como agente e/ou adjuvante terapêutico para o tratamento da leishmaniose. Para isso, o isolamento da LAAO será realizado através de cromatografia líquida rápida de proteínas e sua caracterização será feita a partir do sequenciamento de seus peptídeos internos, determinação da massa molar através de espectrometria de massas, avaliação da especificidade frente a diferentes substratos, determinação de parâmetros cinéticos (Km, Vmáx, Kcat) e avaliação in vitro da ativação induzida em fibroblastos pela análise da citotoxicidade e da dosagem de citocinas, óxido nítrico e mediadores lipídicos. Será também avaliada a sua atividade leishmanicida. (AU)