Melhoramento da termoestabilidade da glucoamilase de aspergillus awamori pela tecnica de pcr mutagenico, purificacao e caracterizacao da enzima.

• Processo: 02/08355-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
• Pesquisador responsável: Roberto da Silva
• Beneficiário: Roberto da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Mutação Glucana 1,4-alfa-glucosidase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aspergillus Awamori | Glucoamilase | Mutacao | Pcr Mutagenico | Sacharomyces Cerevisae

Resumo

A glucoamilase é uma proteína altamente glicosilada que catalisa a liberação hidrolítica da D-glucose a partir da extremidade não redutora do amido e olìgossacarídeos relacionados. A estabilidade da glucoamilase cai rapidamente em torno do 60°C. Uma glucoamilase mais estável, que poderia ser usada a temperaturas mais elevadas, é industrialmente desejável. Neste projeto, faremos mutagênesis aleatórias no gene da glucoamilase selvagem do Aspergillus awamori usando a técnica de PCR mutagênico para gerar quimeras com mutações no gene selvagem. Clones com esta função melhorada terão seus DNAs novamente mutagenizados em novos rounds e re-selecionados num total de 2-3 ciclos até desenvolver quimeras de colônias de levedura que irão produzir enzimas glucoamilase mutantes com a sua termoestabilidade melhorada quando comparadas com a selvagem. A termoestabilidade das enzimas brutas serão avaliadas por testes de inativação térmica seguidos de pelo teste de formação de halos em placas de amido. Depois a enzima será purificada para determinação da constante de inativação térmica, também será caracterizada bioquimicamente para verificação de efeito da mutação nas propriedades cinéticas da enzima. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DE SOUZA, ANGELICA R.; DE ARAUJO, GABRIELA C.; ZANPHORLIN, LETICIA M.; RULLER, ROBERTO; FRANCO, FERNANDA C.; TORRES, FERNANDO A. G.; MERTENS, JEFFREY A.; BOWMAN, MICHAEL J.; GOMES, ELENI; DA SILVA, ROBERTO. Engineering increased thermostability in the GH-10 endo-1,4-beta-xylanase from Thermoascus aurantiacus CBMAI 756. International Journal of Biological Macromolecules, v. 93, n. A, p. 20-26, DEC 2016. (14/02080-4, 14/04272-8, 10/12624-0, 02/08355-8, 11/17658-3)

PAVEZZI, FABIANA CARINA; JACOMASSI CARNEIRO, ANDREIA A.; BOCCHINI-MARTINS, DANIELA ALONSO; ALVES-PRADO, HELOIZA FERREIRA; FERREIRA, HENRIQUE; MARTINS, PAULA M.; GOMES, ELENI; DA SILVA, ROBERTO. Influence of Different Substrates on the Production of a Mutant Thermostable Glucoamylase in Submerged Fermentation. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 163, n. 1, p. 14-24, JAN 2011. (02/08355-8, 07/07930-2, 07/08083-1)

DE SOUZA, ANGELICA R.; DE ARAUJO, GABRIELA C.; ZANPHORLIN, LETICIA M.; RULLER, ROBERTO; FRANCO, FERNANDA C.; TORRES, FERNANDO A. G.; MERTENS, JEFFREY A.; BOWMAN, MICHAEL J.; GOMES, ELENI; DA SILVA, ROBERTO. Engineering increased thermostability in the GH-10 endo-1,4-beta-xylanase from Thermoascus aurantiacus CBMAI 756. International Journal of Biological Macromolecules, v. 93, p. 7-pg., 2016-12-01. (14/04272-8, 10/12624-0, 11/17658-3, 14/02080-4, 02/08355-8)

LOPES GONCALVES, ALINE ZORZETTO; AZEVEDO CARVALHO, ANA FLAVIA; DA SILVA, ROBERTO; GOMES, ELENI. Localization and partial characterization of thermostable glucoamylase produced by newly isolated Thermomyces lanuginosus TO3 in submerged fermentation. Brazilian Archives of Biology and Technology, v. 51, n. 4, p. 857-865, JUL-AUG 2008. (02/08355-8)