Estudos da resistência à apoptose no câncer, modelo cabeça/pescoço: vias de sinalização com ênfase na PIP3-AKT/SET, estresse oxidativo, mitocôndria e correlações

Resumo

Células tumorais, em particular de cabeça/pescoço (HNSCC), apresentam como importante característica a resistência em sofrer apoptose, o que se reflete não somente na agressividade do câncer, como também na ineficácia dos tratamentos contra a doença. O presente projeto temático propõe investigar os mecanismos de resistência de vias de sinalização de apoptose em células HN13 (carcinoma de cavidade oral) comparativamente a células HEK293T (embriônicas renal, como controle não tumoral), mediante processo induzido por tert-butil hidroperóxido e estaurosporina. Métodos bioquímicos e moleculares, envolvendo abordagens nas áreas de câncer, mitocôndria, estresse oxidativo e morte celular, serão empregados nas seguintes avaliações: i) ativação da Akt via fosforilação e sua inativação por PP2A via desfosforilação inibida por SET; ii) convergência da fosforilação da Akt para os mecanismos mitocondriais que modulam a apoptose; iii) envolvimento de espécies reativas de oxigênio (EROs); (iv) identificação de alvos estratégicos de regulação de vias de sinalização envolvendo estresse oxidativo/defesa antioxidante, mitocôndria, apoptose, e câncer pathway finder, a serem selecionados a partir de análises utilizando os sistemas de PCR Arrays Real time associadas a técnicas de RNAi/knockdown e expressão ectópica de proteína. Os estudos de apoptose incluem viabilidade celular, exposição da fosfatidilserina, fragmentação de DNA, ativação de caspases 9, 8 e 3, além de geração/acúmulo de EROs, níveis de glutationa oxidada/reduzida e atividade da superóxido dismutase. Os estudos mitocondriais incluem expressão das proteínas Bax e Bcl-2 oligomerização de Bak com Bax ou com Bcl-2/Bcl-XL e suas interações com a mitocôndria, liberação de fatores apoptogênicos a partir da organela (citocromo c e AIF), potencial de membrana e transição de permeabilidade mitocondrial, níveis de ATP e interação da hexoquinase-II com a mitocôndria. (AU)