SET e esfingolipídeos em câncer de cabeça e pescoço: sinalização, alvos e terapia antitumoral

Resumo

Apesar do grande avanço no tratamento de alguns tipos de câncer, a busca por novos alvos terapêuticos e estratégias de terapia antitumoral para contornar a metástase, recidiva e resistência a terapia, é necessária. A presente proposta temática tem por objetivo definir o papel da proteína SET na via de sinalização dos esfingolipídios, assim como o papel destes, em carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP). Inúmeras abordagens experimentais serão utilizadas tanto in vitro quanto in vivo. Nós realizaremos estudos em linhagens celulares humanas (derivadas de tumor e não tumor), amostras de tumores, e soro de pacientes com câncer. Diferentes métodos serão utilizados para atingir o objetivo proposto, tais como (i) análise de esfingolipídios por espectrometria de massas, (ii) modificações pós-traducionais de proteínas por Western blot, (iii) distribuição celular de proteínas por imunohistoquimica, imunofluorescência ou Western blotting (fracionamento subcelular), (iv) quantificação de RNA e miRNAs por PCR em tempo real, (v) sequenciamento de DNA, (vi) RNA de interferência usando tanto siRNA quanto shRNA, (vii) expressão ectópica em linhagens celulares usando vetores com os cDNAs de interesse, (viii) análises por citometria de fluxo para ciclo celular e identificação de tipos celulares usando anticorpos, (ix) ensaios de angiogênese com células HUVEC, e (x) ensaios de viabilidade celular, invasão e clonogênico. Estes estudos, além da formação de tumores em camundongos nude usando modelo de xenoenxerto de linhagens tumorais humanas e linhagens de carcinoma murino para modelo singênico, poderão tanto ampliar o conhecimento sobre a sinalização por esfingolipídios em câncer de cabeça e pescoço, quanto levar a novos mecanismos/abordagens terapêuticas para o câncer. (AU)