Busca de ligantes e Mapeamento dos domínios da ADAM-17 responsáveis pela interação com os ligantes.

Resumo

As ADAMs apresentam-se com uma expressão aumentada em diversos tipos de câncer inclusive em carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. Em função disso e das vias que essas proteases modulam, as ADAMs têm sido muito associadas com o processo do câncer e sua progressão. São as principais proteases responsáveis pela liberação de ectodomínios de proteínas de superfície celular mediando assim a transdução de sinal de diversos fatores como EGFR. As ADAMs são metaloproteinases compostas em geral por seis domínios conservados, alguns similares a metaloproteinase de veneno de serpente (metaloproteinase, tipo-desintegrina, rico em cisteínas, tipo fator de crescimento epidermal, domínio transmembrana e citoplasmático). Pouco se sabe sobre o papel desses domínios na interação de ADAM17p (proteína da ADAM17) com ligantes e da sua especificidade. Portanto, esse projeto propõe determinar novos ligantes de ADAM17p e estudar o papel desses domínios na interação com os ligantes em queratinócitos normais. Para isso será realizado experimentos de imunoprecipitação com anti-flag e anti-HA da ADAM17p selvagem e de diferentes construções contendo mutações em sítios importantes dos domínios conservados da ADAM17. Com o intuito de determinar a função biológica dessas mutações também será avaliada a atividade ''sheddase'' desses mutantes e a sua co-localização com os ligantes identificados. O conhecimento de novos ligantes e como estes interagem com a ADAM17p pode esclarecer como essa protease atua em diferentes substratos e ativa diferentes vias.