Estudo da regulação de ADAMs em câncer oral

Resumo

Os carcinomas orais de células escamosas (CEC) são altamente invasivos e essa invasão ocorre principalmente através da atividade proteolítica da membrana basal e da matriz extracelular por metaloproteinases. As proteases são reguladoras chaves da interação célula-célula e célula-matriz extracelular e podem estar associadas à tumorigênese e à metástase, e o interesse no potencial dessas moléculas como alvos de agentes anti-câncer tem sido estudado há décadas. As ADAMs, família de proteases de membrana, têm sido consideradas componentes críticos nesse processo por estarem com a expressão aumentada em inúmeros tumores, apresentando forte correlação aos parâmetros de progressão da doença. As ADAMs são caracterizadas principalmente como "sheddases", proteinases que participam da regulação de processos fisiológicos e de desenvolvimento por promoverem a liberação de ectodomínios de proteínas de superfície celular. Além disso, está claro que existe uma via tripla de ativação entre EGFR, GPCR e ADAMs e que as ADAMs funcionam como efetoras da sinalização mediada por GPCR e transativadoras de EGFR, moduladores de vários processos, inclusive de proliferação e migração celular. Recentemente, novos alvos extracelulares resultado da atividade proteolítica do domínio extracelular de ADAMs tem sido revelados, apontando que pouco se conhece sobre essas moléculas considerando uma enorme via de sinalização que está sob o comando dessas proteinases. Além disso, pouco se sabe sobre o mecanismo de ativação dessa família de proteinases e a identidade dos seus ligantes intracelulares. Dessa forma, o objetivo desse projeto será explorar utilizando modelo in vitro de células tumorigênicas e não tumorigênicas, modelo animal e tecido humano, os alvos e a regulação da ADAM-17 utilizando ferramentas de biologia molecular e celular, proteômica e espectrometria de massas. Para isso, estratégias de modulação da expressão de ADAM-17 serão desenvolvidas para determinação dos alvos e dos sítios de clivagens de seus alvos, identificação dos ligantes do domínio citoplasmático, determinação dos sítios de fosforilação no domínio citoplasmático de ADAM-17 e sítios de fosforilação em proteínas de membrana. Além disso, ensaios funcionais de migração, proliferação, adesão, invasão e apoptose serão realizados para avaliar o efeito da sua modulação em células de queratinócitos (HaCaT) e de carcinoma oral de células escamosas (SCC-9). Para avaliação do efeito da modulação de ADAM-17 na tumorigênese, como também para a validação e complementação dos resultados, células com a expressão de ADAM-17 modulada serão injetadas em camundongos. O tumor desenvolvido em camundongos e amostras de carcinoma oral de pacientes serão analisados quanto à composição de proteínas e peptídeos. A expressão gênica de alvos específicos será avaliada em todos os modelos estudados. Os resultados desse estudo poderão ajudar no conhecimento dos ligantes e das vias de sinalização e regulação da ADAM-17 para elucidar alvos nos subproteomas para o desenho de peptídeos e inibidores que modulem a ação dos ligantes de ADAM-17, como revelar moléculas potenciais envolvidas na iniciação e progressão de câncer oral e, com isso, poderá ajudar no desenvolvimento de novas estratégias de diagnóstico e tratamento para essa doença. (AU)