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Estudo da regulação da ADAM17 recombinante pela determinação dos sítios de fosforilação do domínio citoplasmático e de seus ligantes em células normais e de câncer

Processo: 09/18301-1
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de maio de 2010
Vigência (Término): 30 de abril de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Adriana Franco Paes Leme
Beneficiário:Annelize Zambon Barbosa Aragão
Instituição-sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Transdução de sinais   Metaloproteinases   Interação proteína-proteína   Neoplasias

Resumo

As ADAMs (metaloproteinases de mamíferos compostas dos domínios metaloproteinase, tipo-disintegrina e rico em cisteínas, tipo fator de crescimento epidermal, domínio transmembrana e citoplasmático) apresentam-se com expressão aumentada em tumores malignos, como o carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, que é considerado o quinto mais comum no mundo. Considerando as vias que essas proteases podem modular, essas proteases estão muito associadas à tumorigênese e progressão de tumor. Têm sido apontadas como reguladoras chaves dos mecanismos de sinalização celular, pois são responsáveis pela liberação de ectodomínios de proteínas de superfície celular mediando a transdução de sinal entre GPCR e EGFR. Está claro que existe essa via tripla de ativação e que as ADAMs funcionam como efetores da sinalização mediada pela GPCR. Entretanto, pouco se sabe sobre os mecanismos de ativação das ADAMs via domínio citoplasmático e as vias que essas proteases podem regular. Dessa forma, esse projeto se propõe a estudar os mecanismos de ativação das ADAMs via fosforilação do domínio citoplasmático e o seu papel na regulação das vias de sinalização em queratinócitos normais e cancerosos (carcinoma oral de células escamosas). Com essa finalidade, será realizada transfecção e super-expressão de ADAM17 recombinante em células normais e cancerosas. Para determinação dos sítios de fosforilação no domínio citoplasmático, a ADAM17 recombinante será recuperada por imunoprecipitação com anticorpo anti-FLAG e as proteínas que se ligarem às ADAMs serão eluídas com peptídeo FLAG. A determinação dos sítios de fosforilação e a identificação dos ligantes do domínio citoplasmático serão realizadas por espectrometria de massas e a validação dos alvos da ADAM17 será realizada por western blot. Além disso, ensaios de viabilidade, migração e invasão para comparação do efeito da super-expressão da ADAM recombinante no comportamento das células também serão realizados. O conhecimento dos ligantes e das vias de sinalização e regulação das ADAMs podem elucidar alvos atrativos para o desenho de drogas que modulem a ação dos seus ligantes.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ARAGAO, ANNELIZE Z. B.; NOGUEIRA, MARIA LUIZA C.; GRANATO, DANIELA C.; SIMABUCO, FERNANDO M.; HONORATO, RODRIGO V.; HOFFMAN, ZAIRA; YOKOO, SAMI; LAURINDO, FRANCISCO R. M.; SQUINA, FABIO M.; ZERI, ANA CAROLINA M.; OLIVEIRA, PAULO S. L.; SHERMAN, NICHOLAS E.; PAES LEME, ADRIANA F. Identification of Novel Interaction between ADAM17 (a Disintegrin and Metalloprotease 17) and Thioredoxin-1. Journal of Biological Chemistry, v. 287, n. 51, p. 43071-43082, DEC 14 2012. Citações Web of Science: 22.
ARAGAO, ANNELIZE Z. B.; BELLONI, MARILIA; SIMABUCO, FERNANDO M.; ZANETTI, MARIANA R.; YOKOO, SAMI; DOMINGUES, ROMENIA R.; KAWAHARA, REBECA; PAULETTI, BIANCA A.; GONCALVES, ANDERSON; AGOSTINI, MICHELLE; GRANER, EDGARD; COLETTA, RICARDO D.; FOX, JAY W.; PAES LEME, ADRIANA F. Novel Processed Form of Syndecan-1 Shed from SCC-9 Cells Plays a Role in Cell Migration. PLoS One, v. 7, n. 8 AUG 15 2012. Citações Web of Science: 24.

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