Caracterização dos Mecanismos de Ação da Imunoterapia Intravesical com P-MAPA Envolvendo a Via de Sinalização dos Receptores Toll-like (TLR) 2 e 4 na Progressão do Câncer de Bexiga Não-Músculo Invasivo

Resumo

A imunoterapia representa uma das abordagens para o tratamento do câncer. Compostos que são capazes de agir como agonistas dos receptores Toll-like (TLRs) podem representar candidatos promissores a serem desenvolvidos como medicamentos contra o câncer. A alta frequência de recorrência do câncer de bexiga urinária (CB) pode estar relacionada aos baixos efeitos das atuais terapias sobre os mecanismos de reparo tecidual envolvendo os TLRs. Atualmente, a terapia mais eficaz para o câncer de bexiga urinária não-músculo invasivo (CBNMI) é a imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin) associada com a ressecção transuretral. Entretanto, a utilização do BCG está associada à efeitos colaterais de intensidades variadas, desde sintomas irritativos leves até reação sistêmica grave, o que contribui para a interrupção do tratamento além de apresentar um índice de recorrência pós-tratamento, de até 30%. Diante deste cenário destaca-se o P-MAPA, que por sua grande versatilidade e mínima citoxicidade, reveladas através de estudos preliminares in vivo e in vitro, abre uma nova perspectiva para o combate de alguns tipos de cânceres, incluindo o CBNMI. Assim, os objetivos principais deste estudo serão caracterizar os efeitos histopatológicos e moleculares das imunoterapia intravesical com P-MAPA envolvendo as vias de sinalização dos TLRs 2 e 4 no tratamento do CBNMI induzido quimicamente em camundongos selvagens (wild type - WT) e knockouts (KO) para TLR4 e MyD88, bem como estabelecer os possíveis mecanismos de ação desse imunomodulador relacionando as vias de sinalização dos TLRs 2 e 4 com os outros fatores de reparo celular (NF-ºB, p53, PI3K, PTEN, Akt). Os efeitos da imunoterapia com P-MAPA serão comparados com o tratamento com BCG. No presente trabalho serão utilizados 40 camundongos fêmeas da linhagem C57BL/6 (WT), 40 camundongos fêmeas KO para TLR4 e 40 camundongos fêmeas KO para MyD88, todos com 60 dias de idade e mantidos no Centro de Medicina Nuclear da Faculdade de Medicina/USP - São Paulo. Para a indução do CBNMI, 90 animais (sendo 30 animais de cada linhagem) serão anestesiados e induzidos quimicamente com uma dose intravesical de 1,5 mg/kg de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) a cada 15 dias, totalizando 4 doses. Os outros 30 animais (sendo 10 animais de cada linhagem) que não receberão MNU serão considerados como Grupo Controle. Após a indução com MNU, os animais serão submetidos ao exame de tomografia computadorizada de abdome total para detecção do tumor e, posteriormente divididos em 4 grupos (10 animais por grupo) para cada linhagem: Grupo Controle (CT): receberá uma dose intravesical de 0,1 mL de solução fisiológica 0,9% por 6 semanas consecutivas; Grupo MNU (Câncer): receberá o mesmo tratamento que o grupo CT; Grupo MNU-BCG: receberá uma dose intravesical de 106 UFC - 40 mg de BCG por 6 semanas consecutivas; Grupo MNU-P-MAPA: receberá uma dose intravesical de 5 mg/kg de P-MAPA. Após 14 semanas de experimento, as bexigas urinárias serão coletadas e submetidas às análises histopatológicas, imunohistoquímicas e Western Blotting. Espera-se obter uma terapia mais eficaz e com menores efeitos colaterais que possa ser proposta para suplementar ou mesmo substituir às terapias clássicas em utilização, tais como BCG. Além dos progressos esperados nos avanços científicos/tecnológicos, o projeto contribuirá com a realização de pesquisas fundamentais e avançadas, que poderão ser medidas por publicações em revistas especializadas, e principalmente baseadas na capacidade de formar recursos humanos especializados. Finalmente, a execução do presente projeto proporcionará uma integração multidisciplinar de diferentes instituições do país.