Otimização da extração de ácidos nucleicos de material de punção aspirativa por agulha fina de tiroide obtido de lâminas coradas, tecidos fixados em formalina e emblocados em parafina e amostras de sangue estocadas por longo período

Autor(es):Mostrar menos -

Kizys, Marina M. L. ^[1] ; Cardoso, Mirian G. ^[1] ; Lindsey, Susan C. ^[1] ; Harada, Michelle Y. ^[1] ; Soares, Fernando A. ^[1] ; Melo, Maria Clara C. ^[1] ; Montoya, Marlyn Z. ^[1] ; Kasamatsu, Teresa S. ^[1] ; Kunii, Ilda S. ^[1] ; Giannocco, Gisele ^{[1, 2]} ; Martins, Joao Roberto M. ^{[1, 3]} ; Cerutti, Janete M. ^[4] ; Maciel, Rui M. B. ^[1] ; Dias-da-Silva, Magnus R. ^{[1, 3]}

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Univ Fed Sao Paulo, Lab Mol & Translat Endocrinol, Dept Med, Unifesp, EPM, BR-04039032 Sao Paulo - Brazil

^[2] Fac Med ABC FMABC, Dept Morphol & Physiol, Santo Andre, SP - Brazil

^[3] Univ Fed Sao Paulo, EPM, Dept Biochem, Lab Mol & Translat Endocrinol, Sao Paulo - Brazil

^[4] Univ Fed Sao Paulo, EPM, Dept Morphol, Lab Mol & Translat Endocrinol, Sao Paulo - Brazil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia; v. 56, n. 9, p. 618-626, DEC 2012.
• Citações Web of Science: 23

Resumo

OBJETIVO: O isolamento adequado de ácidos nucleicos a partir de sangue periférico, lâmina corada de punção aspirativa por agulha fina, tecido fixado em formalina e emblocado em parafina e tecido fresco é fundamental para assegurar o sucesso de técnicas aplicadas em endocrinologia molecular, principalmente quando lidamos com amostras estocadas por longos períodos ou quando há impossibilidade de nova coleta de amostra de pacientes que perderam o seguimento. Neste trabalho, objetivamos otimizar as metodologias clássicas para a extração de DNA (salting-out) e RNA. MATERIAIS E MÉTODOS: Utilizamos proteinase K, choque térmico, dentre outras modificações, com o objetivo de aumentar a quantidade e a qualidade do material recuperado a partir das amostras descritas acima. RESULTADOS: Isolamos com sucesso DNA e RNA de tais amostras e o material obtido foi adequado para a realização de PCR, perfil de metilação, PCR em tempo real e sequenciamento de DNA. CONCLUSÃO: As técnicas aplicadas neste estudo para isolar ácidos nucleicos permitiram a realização posterior de análises moleculares consistentes e confiáveis. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(9):618-26 (AU)

• Processo FAPESP: 11/20747-8 - Investigação clínica, bioquímica e molecular da paralisia periódica tirotóxica
• Beneficiário: Magnus Régios Dias da Silva
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 06/60402-1 - Carcinoma medular da tiróide: revisitação à clínica, à biologia molecular, à bioquímica e à biologia do desenvolvimento depois dos achados da genética molecular
• Beneficiário: Rui Monteiro de Barros Maciel
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Processo FAPESP: 09/50575-4 - Desenvolvimento de um modelo de tumorigênese in vivo para o Carcinoma Medular de Tiroide através da técnica de transgênese somática em embrião de galinha
• Beneficiário: Susan Chow Lindsey
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Processo FAPESP: 10/19834-0 - Caracterização do padrão de metilação e expressão dos genes RET (via MAPK), HES1 (via Notch) e WNT5A (via WNT/ß-CATENINA) em linhagem celular de carcinoma medular da tiroide (TT)
• Beneficiário: Mirian Gonçalves Cardoso
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica