Rastreamento de variantes de significado desconhecido (VUS) no proto-oncogene RET em pacientes com neoplasia endócrina múltipla tipo 2 e indivíduos saudáveis da população brasileira

• Processo: 13/01476-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2015
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Sergio Pereira de Almeida Toledo
• Beneficiário: Sergio Pereira de Almeida Toledo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Rodrigo de Almeida Toledo ; Roxanne Hatanaka ; Tomoko Sekiya
• Assunto(s): Endocrinologia Neoplasia endócrina múltipla Proto-oncogenes Polimorfismo genético Mutação Técnicas de genotipagem
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Neoplasia Endocrina Múltipla tipo 2 | Proto-oncogene RET | Variantes genéticas de significado desconhecido (VUS) | Endocrinologia

Resumo

A Neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM2) é uma síndrome tumoral transmitida por herança autossômica dominante. As glândulas envolvidas são tireóide, paratireóides e adrenais, sendo suas principais manifestações clínicas o carcinoma medular de tireóide (CMT), feocromocitoma (FEO) e hiperparatiroidismo primário (HPT). A NEM2 é subdividida em NEM2A, NEM2B e CMT familiar e cada sub-forma apresenta um fenótipo característico. Esta síndrome genética é causada por mutações germinativas no proto-oncogene RET, as quais são responsáveis por >95% dos casos de NEM2. As mutações ativadoras do gene RET alteram a estrutura da proteína codificada, RET, ativando esse receptor constitutivamente e independentemente do ligante, levando uma célula normal ao desenvolvimento de neoplasia. Segundo os Consensos Internacionais de 2001 sobre NEMs e de 2009 sobre CMT, aos portadores de mutações germinativas no gene RET deve-se recomendar a tireoidectomia total preventiva em idades específicas e adequadas, na tentativa de se obter a cura bioquímica (calcitonina <2pg/ml) e clínica do CMT.Atualmente, com o uso de novas tecnologias, o número de variantes genéticas descritas no RET aumentou significativamente (n=48). Entretanto, a patogenicidade de várias dessas variantes ainda permanece desconhecida. Isso pode ter ocorrido por várias razões, sendo uma delas o fato de estas variantes terem sido encontradas em casos esporádicos de CMT (sem história familial), impossibilitando assim a análise de co-segregação e de correlação genótipo-fenótipo.A identificação de uma variante de patogenicidade conhecida (mutação causadora de doença) no gene RET leva à indicação de tireoidectomia total preventiva (PTTx) e profilática nos familiares jovens e assintomáticos do casos-índice que carreguem esta mutação, o que aumenta bastante a chance de prevenção e cura da doença. Ao contrario, a identificação de polimorfismos comuns no RET não leva à indicação de PTTx e os portadores destes polimorfismos devem ser excluídos do seguimento clínico. A presença de uma variante com significado desconhecido (VUS, variant of unknown significance) em um indivíduo gera uma situação mais complexa, pois esta informação não é suficiente para se decidir ou não pelo tratamento cirúrgico, mas também não exclui a necessidade do rastreamento clínico periódico. Portanto, pacientes portadores de VUS devem ser seguidos periodicamente por meio de exames de imagem e dosagens de calcitonina, o marcador tumoral do CMT, sem que se saiba realmente se apresentam ou não predisposição genética para CMT/NEM2. Além disto, quando detectados por esses testes periódicos o CMT pode frequentemente já se apresentar em seus estágios mais avançados (com metástases), impedindo a prevenção do CMT associado à NEM2.Por isso, propõe-se aqui estudar as frequências alélicas das 48 VUS já descritas nos éxons hotspots do RET em 1.000 indivíduos-controle saudáveis da população brasileira, e esses resultados serão comparados com os de 50 pacientes portadores de NEM2. A genotipagem das VUS será realizada por PCR em Tempo Real com sondas TaqMan® utilizando a plataforma OpenArray® Real-Time PCR. Também realizaremos um estudo in silico dessas variantes utilizando sete programas preditivos de computador a fim de verificar seu potencial patogênico. Espera-se com esse estudo contribuir com dados de valor para a literatura científica, visando aperfeiçoar o diagnóstico molecular de pacientes com NEM2 e de seus familiares portadores dessas VUS, e sobre as quais ainda permanecem dúvidas quanto a serem polimorfismos ou mutações. (AU)

Publicações científicas

(7)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MACIEL, RUI M. B.; CAMACHO, CLEBER P.; ASSUMPCAO, LIGIA V. M.; BUFALO, NATASSIA E.; CARVALHO, ANDRE L.; DE CARVALHO, GISAH A.; CASTRONEVES, LUCIANA A.; DE CASTRO JR, FRANCISCO M.; CEOLIN, LUCIELI; CERUTTI, JANETE M.; et al. Genotype and phenotype landscape of MEN2 in 554 medullary thyroid cancer patients: the BrasMEN study. ENDOCRINE CONNECTIONS, v. 8, n. 3, p. 289-298, MAR 2019. (14/06570-6, 06/60402-1, 13/01476-9, 09/50575-4, 12/21942-1, 10/51547-1, 10/51546-5)

RODRIGUES, KARINE C.; TOLEDO, RODRIGO A.; COUTINHO, FLAVIA L.; NUNES, ADRIANA B.; MACIEL, RUI M. B.; HOFF, ANA O.; TAVARES, MARCOS C.; TOLEDO, SERGIO P. A.; LOURENCO, JR., DELMAR M.. Assessment of Depression, Anxiety, Quality of Life, and Coping in Long-Standing Multiple Endocrine Neoplasia Type 2 Patients. THYROID, v. 27, n. 5, p. 693-706, MAY 2017. (13/19810-2, 13/01476-9, 12/04698-0)

TOLEDO, SERGIO P. A.; LOURENCO, JR., DELMAR M.; SEKIYA, TOMOKO; LUCON, ANTONIO M.; BAENA, MARCOS E. S.; CASTRO, CLAUDIO C.; BORTOLOTTO, LUIZ A.; ZERBINI, MARIA C. N.; SIQUEIRA, SHEILA A. C.; TOLEDO, RODRIGO A.; et al. Penetrance and Clinical Features of Pheochromocytoma in a Six-Generation Family Carrying a Germline TMEM127 Mutation. JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM, v. 100, n. 2, p. E308-E318, FEB 2015. (13/19810-2, 13/01476-9)

TOLEDO, RODRIGO A.; HATAKANA, ROXANNE; LOURENCO, JR., DELMAR M.; LINDSEY, SUSAN C.; CAMACHO, CLEBER P.; ALMEIDA, MARCIO; LIMA, JR., JOSE V.; SEKIYA, TOMOKO; GARRALDA, ELENA; NASLAVSKY, MICHEL S.; et al. Comprehensive assessment of the disputed RET Y791F variant shows no association with medullary thyroid carcinoma susceptibility. Endocrine-Related Cancer, v. 22, n. 1, p. 65-76, FEB 2015. (10/51547-1, 13/01476-9, 06/60402-1)

SEKIYA, TOMOKO; BRONSTEIN, MARCELLO D.; BENFINI, KATIUSCIA; LONGUINI, VIVIANE C.; JALLAD, RAQUEL S.; MACHADO, MARCIO C.; GONCALVES, TATIANA D.; OSAKI, LUCIANA H.; HIGASHI, LEONARDO; VIANA-, JR., JOSE; et al. p27 variant and corticotropinoma susceptibility: a genetic and in vitro study. Endocrine-Related Cancer, v. 21, n. 3, p. 395-404, JUN 2014. (09/15386-6, 09/11942-1, 13/01476-9)

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MACIEL, RUI M. B.; CAMACHO, CLEBER P.; ASSUMPCAO, LIGIA V. M.; BUFALO, NATASSIA E.; CARVALHO, ANDRE L.; DE CARVALHO, GISAH A.; CASTRONEVES, LUCIANA A.; DE CASTRO JR, FRANCISCO M.; CEOLIN, LUCIELI; CERUTTI, JANETE M.; et al. Genotype and phenotype landscape of MEN2 in 554 medullary thyroid cancer patients: the BrasMEN study. ENDOCRINE CONNECTIONS, v. 8, n. 3, p. 10-pg., 2019-03-01. (09/50575-4, 13/01476-9, 14/06570-6, 12/21942-1, 10/51546-5, 06/60402-1, 10/51547-1)