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Standardization and validation of ex vivo rabbit intestinal loop and in vitro mucinolytic activity assays for investigation of mucus induction and mucinase production during infection with pathogenic Escherichia coli strains

Grant number: 23/03097-7
Support Opportunities:Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training
Start date: July 01, 2023
End date: June 30, 2025
Field of knowledge:Biological Sciences - Microbiology - Biology and Physiology of Microorganisms
Principal Investigator:Tânia Aparecida Tardelli Gomes do Amaral
Grantee:Liana de Oliveira Trovão
Host Institution: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brazil
Associated research grant:17/14821-7 - Exploring novel virulence strategies in Escherichia coli, AP.TEM

Abstract

A interação inicial entre enteropatógenos e o intestino do hospedeiro se dá por meio da camada de muco secretada pelas células caliciformes, que reveste e protege contra a ligação direta e prejudicial dos microrganismos. Cepas de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) são classificadas como EPEC típica (tEPEC) ou atípica (aEPEC) com base na presença de um plasmídeo de virulência denominado pEAF (EPEC adherence factor plasmid), que está presente apenas nas tEPEC. Nosso grupo demonstrou previamente que duas cepas de aEPEC (0421-1 e 3991-1) induzem aumento significativo na produção de muco, em alça ileal ligada de coelho in vivo, sendo que uma dessas cepas era capaz de degradar mucinas para sua nutrição. Esses fenômenos não foram observados com uma cepa protótipo de tEPEC. Para contribuir com o esclarecimento dos mecanismos envolvidos nesses fenômenos (indução da produção e degradação de muco intestinal) e avaliar se eles ocorrem em outras cepas de aEPEC e de outros patotipos de E. coli, o objetivo deste projeto é desenvolver umensaio em intestino de coelhos ex vivo e validar os achados em comparação com aqueles obtidos no modelo in vivo. Essa abordagem poderá favorecer o ensaio de um número maior de cepas, empregando-se menos animais. Também será padronizada a purificação de mucina humana, não disponível comercialmente, a partir de células caliciformes (LST174). A mucina purificada será usada para a pesquisa de atividade mucinolítica nas cepas patogênicas de E. coli, empregando-se ensaios in vitro.

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Scientific publications
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TROVAO, LIANA DE OLIVEIRA; VIEIRA, MONICA APARECIDA MIDOLLI; SANTOS, ANA CAROLINA DE MELLO; PUNO-SARMIENTO, JUAN JOSUE; NUNES, PEDRO HENRIQUE SOARES; SANTOS, FERNANDA FERNANDES; ROCHA, VICTORIA GALDINO PAVLENCO; KNOBL, TEREZINHA; NAVARRO-GARCIA, FERNANDO; GOMES, TANIA APARECIDA TARDELLI. Identification of a genomic cluster related to hypersecretion of intestinal mucus and mucinolytic activity of atypical enteropathogenic Escherichia coli (aEPEC). FRONTIERS IN CELLULAR AND INFECTION MICROBIOLOGY, v. 14, p. 17-pg., . (23/03097-7, 22/12006-2, 17/14821-7, 23/05910-7)