Aperfeiçoamento dos inibidores da enzima G6PDH para desenvolvimento de fármacos contra Chagas

Resumo

A enzima glicose-6-fosfato desidrogenase de Tripanosoma cruzi (TcG6PDH) catalisa o primeiro passo da via de pentose realizando a oxidação de glicose-6-fosfato (G6P) a 6-fosfoglucolactona mediante a redução de NADP+ a NADPH. A TcG6PDH tem sido estudada por nosso grupo como um dos alvos moleculares para o desenvolvimento de fármacos contra a doença de Chagas. Entre os avanços mais recentes do nosso grupo destacam-se: a descoberta de novos inibidores por ensaios de High Throughput Screening (HTS) (Mercali G. et al. J. Biomol. Screen, 2014, 19(10):1362-71) e a determinação da estrutura cristalográfica para o complexo ternário formado entre a TcG6PDH, G6P e NADPH (Mercaldi G et al. FEBS letters, aceito para publicação). Anterior a publicação dos nossos resultados, as únicas opções de inibidores para TcG6PDH eram os esteroides derivados de epiandrosterona. A campanha de HTS contra a TcG6PDH resultou na identificação de novos inibidores não-esteroidais, incompetitivos, porém seletivos para a enzima do parasita. O presente projeto irá avançar com a caracterização destes novos inibidores através da realização de ensaios celulares preditivos de eficácia e citotoxicidade. Estes novos inibidores também serão usados em experimentos de soaking em cristais da TcG6PDH, com o propósito de identificar o sítio de ligação pela determinação da estrutura cristalográfica de um complexo enzima-inibidor.Outro ponto que será investigado neste projeto é a existência de uma cavidade adjacente ao sítio de ligação de NADP com potencial para o desenho racional de fármacos. Esta cavidade foi observada exclusivamente na estrutura da TcG6PDH e consequentemente poderá levar ao desenvolvimento e inibidores altamente seletivos pela enzima do parasita. A validação desta cavidade será realizada por mutagênese sítio-dirigida e síntese de inibidores específicos. (AU)