Expressão de genes heterólogos em células de dípteros: biologia molecular e engenharia de processos

• Processo: 02/09482-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2003
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carlos Augusto Pereira
• Beneficiário: Carlos Augusto Pereira
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Auxílio(s) vinculado(s): 07/51026-9 - Metabolism evaluation of Drosophila melanogaster S2 cells cultivated in animal protein free media producing the G glycoprotein from rabies virus, AR.EXT
• Bolsa(s) vinculada(s): 07/52264-0 - Desenvolvimento de bioprocessos com células CHO e S2 em biorreatores para produção em larga escala de proteínas recombinantes, BP.MS; 06/57794-5 - Desenvolvimento de bioprocesso para producao em larga escala de hormonios recombinantes e seus antagonistas em culturas de celulas cho em biorreatores., BP.PD; 05/51746-6 - Expressao da proteina viral (gvp - raiva) ou da proteina fluorescente (egfp) em celulas de drosophila melanogaster., BP.MS; + mais bolsas vinculadas 05/56231-4 - Desenvolvimento de técnicas de otimização de bioprocesso no cultivo de células de inseto, BP.TT; 03/08978-8 - Co-expressão de genes virais (GPV - raiva e HBsAg-hepatite B) com o gene da Green Fluorescent Protein (EGFP) em células de Drosophila melanogaster como instrumento de optimização de bioprocesso para produção de antígenos virais, BP.MS; 03/12624-7 - Optimizacao do bioprocesso de cultura de celulas de drosofila (s2) transfectadas atraves de estudo de suas condicoes metabolicas., BP.IC; 01/08914-4 - Expressão dos genes do vírus da hepatite B (HBsAg) e do vírus da raiva (GPV/PV) em células de drosófilas, BP.PD - menos bolsas vinculadas
• Assunto(s): Virologia Vírus da raiva Imunologia Hepatite B Diptera
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressao Genica | Imunologia | Modelagem Matematica | Virologia
• Publicação FAPESP: https://www.fapesp.br/tematicos/saude_pereira.pdf

Resumo

O objetivo geral do projeto é a clonagem dos genes da glicoproteína G do vírus da raiva e do antígeno de superfície do vírus da hepatite B em vetores de expressão, para a construção de células de dípteros (S2 -Drosophila melanogaster) estavelmente transformadas que expressem estes genes de forma constitutiva e indutível (sub projeto 1) e a optimização do bioprocesso de produção em culturas celulares (sub projetos 2, 3 e 4). Esta será feita através de avaliação de propriedades antigênicas dos antígenos (sub projeto 1), optimização de meio de cultura (sub projeto 2), desenvolvimento de métodologia de purificação do produto (sub projeto 2), seleção de bioprocesso de cultura celular em bioreator (sub projeto 3) e elaboração de modelo matemático (sub projeto 4). Desta forma, com íntima associação de áreas da biologia, engenharia e matemática pretendemos propor de forma original, viável e completa um protocolo para produção de antígenos virais. (AU)

Publicações científicas

(23)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BATISTA, FABIANA R. X.; MORAES, ANGELA M.; BUENTEMEYER, HEINO; NOLL, THOMAS. Influence of culture conditions on recombinant Drosophila melanogaster S2 cells producing rabies virus glycoprotein cultivated in serum-free medium. BIOLOGICALS, v. 37, n. 2, p. 108-118, APR 2009. (02/09482-3)

SWIECH‚ K.; ROSSI‚ N.; ASTRAY‚ R.M.; SUAZO‚ C.A.T.. Enhanced production of recombinant rabies virus glycoprotein (rRVGP) by Drosophila melanogaster S2 cells through control of culture conditions. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 67-72, 2008. (02/09482-3, 01/09038-3, 01/08914-4)

JORGE‚ S.A.C.; SANTOS‚ A.S.; SPINA‚ Â.; PEREIRA‚ C.A.. Expression of the hepatitis B virus surface antigen in Drosophila S2 cells. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 51-59, 2008. (02/09482-3, 05/50565-8, 01/08914-4)

GALESI‚ A.L.L.; AGUIAR‚ M.A.; ASTRAY‚ R.M.; AUGUSTO‚ E.F.P.; MORAES‚ Â.M.. Growth of recombinant Drosophila melanogaster Schneider 2 cells producing rabies virus glycoprotein in bioreactor employing serum-free medium. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 73-81, 2008. (03/00675-6, 02/09482-3)

BATISTA‚ F.R.X.; PEREIRA‚ C.A.; MENDONÇA‚ R.Z.; MORAES‚ Â.M.. Formulation of a protein-free medium based on IPL-41 for the sustained growth of Drosophila melanogaster S2 cells. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 11-22, 2008. (02/09482-3)

SANTOS, MARIZA G.; JORGE, SORAIA A. C.; BRILLET, KARL; PEREIRA, CARLOS A.. Improving heterologous protein expression in transfected Drosophila S2 cells as assessed by EGFP expression. Cytotechnology, v. 54, n. 1, p. 15-24, May 2007. (02/04003-0, 05/50565-8, 01/08914-4, 02/09482-3, 03/08978-8)

AUGUSTO, ELISABETH F. P.; MORAES, ANGELA M.; PICCOLI, ROSANE A. M.; BARRAL, MANUEL F.; SUAZO, CLAUDIO A. T.; TONSO, ALDO; PEREIRA, CARLOS A.. Nomenclature and guideline to express the amount of a membrane protein synthesized in animal cells in view of bioprocess optimization and production monitoring. BIOLOGICALS, v. 38, n. 1, p. 105-112, JAN 2010. (02/09482-3)

ROSSI, NICKELI; SILVA, BRUNA G.; ASTRAY, RENATO; SWIECH, KAMILLA; PEREIRA, CARLOS A.; SUAZO, CLAUDIO A. T.. Effect of hypothermic temperatures on production of rabies virus glycoprotein by recombinant Drosophila melanogaster S2 cells cultured in suspension. Journal of Biotechnology, v. 161, n. 3, p. 328-335, OCT 31 2012. (02/09482-3)

BATISTA, FABIANA R. X.; GRECO, KATIA N.; ASTRAY, RENATO M.; JORGE, SORAIA A. C.; AUGUSTO, ELISABETH F. P.; PEREIRA, CARLOS A.; MENDONCA, RONALDO Z.; MORAES, ANGELA M.. Behavior of Wild-type and Transfected S2 Cells Cultured in Two Different Media. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 163, n. 1, p. 1-13, JAN 2011. (02/09482-3)

SUAREZ-PATINO, SANDRA FERNANDA; MANCINI, RENATO ASTRAY; PEREIRA, CARLOS AUGUSTO; TORRES SUAZO, CLAUDIO ALBERTO; MENDONCA, RONALDO ZUCATELLI; CALIL JORGE, SORAIA ATTIE. Transient expression of rabies virus glycoprotein (RVGP) in Drosophila melanogaster Schneider 2 (S2) cells. Journal of Biotechnology, v. 192, n. A, p. 255-262, DEC 20 2014. (10/08742-8, 11/08331-0, 02/09482-3)

MORAES, ANGELA M.; JORGE, SORAIA A. C.; ASTRAY, RENATO M.; SUAZO, CLAUDIO A. T.; CALDERON RIQUELME, CAMILO E.; AUGUSTO, ELISABETH F. P.; TONSO, ALDO; PAMBOUKIAN, MARILENA M.; PICCOLI, ROSANE A. M.; BARRAL, MANUEL F.; et al. Drosophila melanogaster S2 cells for expression of heterologous genes: From gene cloning to bioprocess development. BIOTECHNOLOGY ADVANCES, v. 30, n. 3, p. 613-628, MAY-JUN 2012. (02/09482-3)

MENDONÇA‚ R.Z.; GRECO‚ K.N.; SOUSA‚ A.P.B.; MORAES‚ R.H.P.; ASTRAY‚ R.M.; PEREIRA‚ C.A.. Enhancing effect of a protein from Lonomia obliqua hemolymph on recombinant protein production. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 83-91, 2008. (02/09482-3, 03/08728-1)

PAMBOUKIAN‚ M.M.; JORGE‚ S.A.C.; SANTOS‚ M.G.; YOKOMIZO‚ A.Y.; PEREIRA‚ C.A.; TONSO‚ A.. Insect cells respiratory activity in bioreactor. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 37-44, 2008. (02/09482-3)

SWIECH‚ K.; ROSSI‚ N.; SILVA‚ B.G.; JORGE‚ S.A.C.; ASTRAY‚ R.M.; SUAZO‚ C.A.T.. Bioreactor culture of recombinant Drosophila melanogaster S2 cells: characterization of metabolic features related to cell growth and production of the rabies virus glycoprotein. Cytotechnology, v. 57, n. 1, p. 61-66, 2008. (02/09482-3, 01/09038-3, 01/08914-4)

BATISTA‚ F.R.X.; PEREIRA‚ C.A.; MENDONÇA‚ R.Z.; MORAES‚ A.M.. Enhancement of Sf9 cells and baculovirus production employing Grace’s medium supplemented with milk whey ultrafiltrate. Cytotechnology, v. 49, n. 1, p. 1-9, 2005. (02/09482-3)

MENDONCA, RONALDO Z.; GRECO, KATIA N.; MORAES, ROBERTO H. P.; ASTRAY, RENATO M.; BARRAL, M.. Study of kinetic parameters for the production of recombinant rabies virus glycoprotein. Cytotechnology, v. 60, n. 1-3, p. 143-151, JUL 2009. (02/09482-3, 03/08728-1)

FABIANA R. X. BATISTA; CARLOS A. PEREIRA; RONALDO Z. MENDONÇA; ANGELA M. MORAES. Evaluation of concentrated milk whey as a supplement for SF9 Spodoptera frugiperda cells in culture. ELECTRONIC JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, v. 9, n. 5, p. 0-0, 2006-10-15. (02/09482-3)

VENTINI, DANIELLA CRISTINA; ASTRAY, RENATO MANCINI; NOBRE LEMOS, MARCOS ALEXANDRE; CALIL JORGE, SORAIA ATTIE; CALDERON RIQUELME, CAMILO; TORRES SUAZO, CLAUDIO ALBERTO; TONSO, ALDO; PEREIRA, CARLOS AUGUSTO. Recombinant rabies virus glycoprotein synthesis in bioreactor by transfected Drosophila melanogaster S2 cells carrying a constitutive or an inducible promoter. Journal of Biotechnology, v. 146, n. 4, p. 169-172, APR 15 2010. (05/51746-6, 07/52264-0, 02/09482-3)

VENTINI, DANIELLA C.; DAMIANI, RENATA; SOUSA, ALVARO P. B.; DE OLIVEIRA, JOAO E.; PERONI, CIBELE N.; RIBELA, MARIA T. C. P.; BARTOLINI, PAOLO; TONSO, ALDO; SOARES, CARLOS R. J.; PEREIRA, CARLOS A.. Improved Bioprocess with CHO-hTSH Cells on Higher Microcarrier Concentration Provides Higher Overall Biomass and Productivity for rhTSH. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 164, n. 4, p. 401-409, JUN 2011. (07/52264-0, 05/60826-3, 02/09482-3, 06/57794-5)

NOBRE LEMOS, MARCOS ALEXANDRE; DOS SANTOS, ALEXANDRA SOUZA; ASTRAY, RENATO MANCINI; PEREIRA, CARLOS AUGUSTO; CALIL JORGE, SORAIA ATTIE. Rabies virus glycoprotein expression in Drosophila S2 cells. I: Design of expression/selection vectors, subpopulations selection and influence of sodium butyrate and culture medium on protein expression. Journal of Biotechnology, v. 143, n. 2, p. 103-110, AUG 20 2009. (05/51746-6, 02/09482-3)

RODAS‚ V.M.; MARQUES‚ F.H.; HONDA‚ M.T.; SOARES‚ D.M.; JORGE‚ S.A.C.; ANTONIAZZI‚ M.M.; MEDUGNO‚ C.; CASTRO‚ M.E.B.; RIBEIRO‚ B.M.; SOUZA‚ M.L.; et al. Cell culture derived AgMNPV bioinsecticide: biological constraints and bioprocess issues. Cytotechnology, v. 48, n. 1, p. 27-39, 2005. (00/02720-0, 02/06924-5, 02/09482-3, 00/08460-0)

SUAREZ-PATINO, SANDRA FERNANDA; MANCINI, RENATO ASTRAY; PEREIRA, CARLOS AUGUSTO; TORRES SUAZO, CLAUDIO ALBERTO; MENDONCA, RONALDO ZUCATELLI; CALIL JORGE, SORAIA ATTIE. Transient expression of rabies virus glycoprotein (RVGP) in Drosophila melanogaster Schneider 2 (S2) cells. Journal of Biotechnology, v. 192, p. 8-pg., 2014-12-20. (11/08331-0, 10/08742-8, 02/09482-3)

PICCOLI, R. A. M.; BATISTA, F. R. X.; MORAES, A. M.; BARRAL, M. F.; AGUIAR, M. A.; LEO, P.; AUGUSTO, E. F. P.; JENKINS, N; BARRON, N; ALVES, PM. Metabolic Modeling of Drosophila melanogaster Cells Under the Balanced Growth Condition. PROCEEDINGS OF THE 21ST ANNUAL MEETING OF THE EUROPEAN SOCIETY FOR ANIMAL CELL TECHNOLOGY (ESACT), 2009, v. 5, p. 5-pg., 2012-01-01. (02/09482-3)