A manutenção e a maturação de uma linhagem celular de oligodendrócitos

• Processo: 19/05747-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Daniel Martins-de-Souza
• Beneficiário: Bradley Joseph Smith
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/25588-1 - Da compreensão básica a biomarcadores clínicos para a esquizofrenia: um estudo multidisciplinar centrado na neuroproteômica, AP.TEM
• Assunto(s): Maturação Linhagem celular Expressão de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Linhagem de células | Maturação | Oligodendrócitos | Linhagem Celular

Resumo

Várias investigações realizadas no projeto principal envolverão células MO3.13. As células MO3.13 expressam as características fenotípicos de oligodendrócitos primários, além dos marcadores de superfície como galactocerebrosidase (GalC) e myelin-associated glycoprotein (MAG). Neste contexto, a caracterização da expressão proteica é um aspecto importante, quando se considera usar MO3.13 como modelo para investigar desordens associadas ao cérebro e o sistema nervoso central, no entanto não é incluída nas caracterizações já estabelecidas. O bolsista manterá esta linhagem celular para futuras investigações e a preparará para as análises proteômicas. As células MO3.13 serão cultivadas em DMEM contendo 10% (v/v) soro fetal bovino, penicilina (100 U/mL) e estreptomicina (100 ¼g/mL) aos 37°C em 5% CO2. Os pellets de células MO3.13 serão homogeneizados em 50 µL de 7M ureia, 2M tioureia, 4% CHAPS, 2% ASB-14 e 70 mM DTT, usando um kit de homogeneização (GE Healthcare). Os lisados proteicos serão centrifugados por 10 min a 14 000 rpm, os sobrenadantes coletados e concentrações de proteína determinadas pelo ensaio Qubit. Cinquenta µg de cada amostra serão diluídos em tampão de amostra para SDS-PAGE, aquecidos por 5 min aos 95°C e separados usando mini-géis de SDS-PAGE 12%. As proteínas serão visualizadas pelo corante Coomassie brilliant blue e cortados. Cada fatia será então sujeitada à digestão in gel, e os peptídeos resultantes serão armazenados aos -20°C antes das análises de espectrometria de massas. Para a maturação destas células, se usará o protocolo estabelecido neste laboratório (Seabra G et al. Methods Mol Biol. 2019; 1916:113-121).

Publicações científicas

(6)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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