Análise de genes moduladores do fenótipo da forma não clássica da deficiência da 21-hidroxilase

Resumo

A forma não clássica da deficiência da 21-hidroxilase é uma freqüente doença autossômica recessiva caracterizada por manifestações hiperandrogênicas durante o desenvolvimento, causadas por mutações no gene do P45c21. É observada correlação do genótipo com a forma clínica e com os valores da 17OH-progesterona; porém não com a intensidade das manifestações hiperandrogênicas e com os valores basais de testosterona. Para tanto, sugere-se variações individuais na sensibilidade periférica aos andrógenos; entretanto, os mecanismos envolvidos não foram avaliados na literatura. Os andrógenos atuam através de seu receptor (AR), cujo gene apresenta um trato polimórfico CAG, que modula a atividade de transativação. Os principais genes envolvidos na metabolização dos andrógenos são CYP3A4 e 3A5 e este último, possui polimorfismos que alteram sua expressão. Supomos que polimorfismos nestes genes, envolvidos na ação e/ou biodisponibilidade dos andrógenos, poderiam modular o fenótipo da deficiência da 21-hidroxilase. Objetivos: Correlacionar a distribuição alélica do trato CAG e os polimorfismos do CYP3A5 com a intensidade das manifestações hiperandrogênicas e com os níveis de testosterona em pacientes com a forma não clássica. Casuística: selecionamos 75 pacientes e 100 controles. Metodologia: DNA de leucócitos foi extraído pela técnica salting out. As regiões de repetições CAG serão amplificadas por PCR, os produtos submetidos à eletroforese capilar e analisados pelo software GeneScan. O padrão de inativação do cromossomo X será avaliado por digestão com a enzima Hpa II e subseqüente amplificação da região CAG. O gene CYP3A5 será amplificado por PÇR com primers específicos e os produtos submetidos à reação de seqüenciamento e eletroforese capilar em seqüenciador automático. Os resultados serão comparados com as respectivas seqüências selvagens depositadas no GeneBank. Na análise estatística serão empregados os testes de Chi-quadrado, Mann Whitney e Kruskal Wallis. Esta pesquisa representa a continuidade de Projeto Temático FAPESP nº 2005/04726-0 no qual adicionamos o estudos de novos genes em doenças que alteram o processo do crescimento e/ou desenvolvimento humano. (AU)