Análise mecanístico-funcional do microRNA 1914-5p no processo pró-esteatótico hepático não alcoólico em cultura celular

Resumo

Atualmente, as doenças hepáticas de acúmulo de gordura e não alcoólicas (NAFLD) são consideradas um problema de saúde pública mundial. Essas patogenias se caracterizam pelo acúmulo excessivo de gordura no fígado causado por diferentes etiologias, cujos aspectos moleculares que subsidiam a progressão das NAFLD a estágios mais avançados ainda não se encontram completamente elucidados. Em proposta anterior apoiada pela FAPESP, nosso grupo de pesquisa caracterizou o microRNA-1914-5p como responsivo ao tratamento com o peptídeo angiotensina-(1-7) e como um elemento modulador do metabolismo de lipídeos em células estreladas hepáticas (HSCs) LX-2, que atuam diretamente no estabelecimento da fibrogênese hepática. Sendo assim, caracterizar a atuação funcional do miR-1914-5p no processo esteatótico hepático é relevante, pois poderá contribuir com estratégias terapêuticas futuras. Para isso, modelos celulares simuladores de esteatose serão estabelecidos, utilizando-se linhagens de hepatócitos em cocultivo com LX-2, que serão transfectadas com moléculas mimetizadora e/ ou inibidora do miR-1914-5p. Ensaios celulares e moleculares subsequentes viabilizarão o estudo dos efeitos das pequenas moléculas na fisiopatologia celular. Entre esses ensaios, uma avaliação do perfil da produção de triacilgliceróis e moléculas de colesterol nas culturas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS) será fundamental para a escolha do modelo de esteatose a ser utilizado nas etapas subsequentes dessa proposta. Para se avaliar o efeitos globais do miR-1914-5p em nosso modelo, a metodologia da proteômica shotgun será realizada, visando a caracterização de moléculas chaves na patologia e que são moduladas de maneira direta ou indeireta pelo miRNA em análise. A validação funcional de tais proteínas se dará em ensaios de Western blot, bioquímicos e pelo silenciamento ou superexpressão gênica. (AU)