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MALDI-TOF and ESI-MS fingerprinting for bacteria identification in culture media and semen as a tool for sanitary excelence in bovine embryo in vitro production

Grant number: 11/06191-7
Support Opportunities:Scholarships in Brazil - Post-Doctoral
Start date: September 01, 2011
End date: January 31, 2015
Field of knowledge:Agronomical Sciences - Veterinary Medicine - Animal Reproduction
Principal Investigator:Marcos Nogueira Eberlin
Grantee:Alessandra Tata
Host Institution: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brazil
Associated scholarship(s):13/15575-9 - Screening and mapping of fungal quorum sensing by ambient mass spectrometry: chemical profiling and localization of molecules involved in networking biocontrol among fungal agents and different phytopathogens, BE.EP.PD

Abstract

A qualidade da carne brasileira, a qual é reconhecida mundialmente, é o resultado da seleção genética na raça Nelore, naturalmente mais resistente à alta temperatura do clima tropical, à doenças e diversos parasitas, comparando-se às raças taurinas. Entretanto, o Brasil não é líder em ciência e desenvolvimento de novas técnicas em biotecnologias da reprodução bovina. Recentemente, um dos revisores de nossos artigos científicos comentou que nosso País "não pode ser considerado líder em produção in vitro de embriões somente pelo fato de produzi-los em maior quantidade". Dessa forma, precisamos reconhecer que os investimentos em pesquisas e inovação são de grande necessidade as biotecnologias como a fertilização in vitro (FIV) e transferência nuclear (TN). A certificação sanitária de embriões representa um grande desafio para o comércio de embriões de disseminação da alta qualidade de genética mundial por meio de embriões produzidos por FIV e TN. Dessa forma, empresas dedicadas à biotecnologia de embriões bovinos devem incorporar procedimentos sanitários em sua rotina visando a exportação de embriões. Também há necessidade de um diagnóstico sanitário da produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, ou seja, um estudo epidemiológico visando rastrear e evitar a contaminação do meio de cultura com bactérias presentes no ambiente das fazendas e por sêmen congelado. Uma vez que a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos representa uma percentagem considerável do número total de embriões bovinos produzidos no Brasil e há necessidade de metodologias de identificação de presença de microrganismos contaminantes do processo de PIV, o objetivo deste projeto interdisciplinar e colaborativo é propor a utilização de métodos reconhecidamente práticos e eficazes por espectrometria de massas (MS) para a identificação rápida de bactérias e estudo epidemiológico por meio do perfil de proteínas conservadas ou por seus metabólitos presentes em meios de cultura e amostras de sêmen, visando o rastreamento de fontes contaminantes e introduzindo uma nova ferramenta de controle de contaminação bacteriana em PIV. O delineamento experimental inclui a identificação de microrganismos contaminantes de meios de cultura e amostras de sêmen provenientes da Empresa In Vitro Brasil Ltda, localizada na cidade de Mogi Mirim-SP. Serão utilizadas duas técinas de MS: ionização por dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF), combinada com um software contendo uma base de dados bacteriana (Biotyper, Bruker Daltonics, EUA), e a caracterização química de metabólitos por MS com fonte de ionização por electrospray (ESI-MS) de bactérias em busca de biomarcadores capazes de indicar de crescimento bacteriano em fase inicial. Para um número representativo de amostras, será realizada a identificação microbiológica clássica para comparação com os resultados de MALDI-TOF e ESI-MS. A proximidade da Empresa In Vitro Brasil Ltda e UNICAMP (55Km), bem como a interdisciplinaridade e aplicabilidade deste projeto deverão resultar na introdução de estratégias inovadoras e relevantes para o controle sanitário do PIV em bovinos, assim como publicações de impacto científico na área de biotecnologia de embriões. (AU)

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Scientific publications (13)
(The scientific publications listed on this page originate from the Web of Science or SciELO databases. Their authors have cited FAPESP grant or fellowship project numbers awarded to Principal Investigators or Fellowship Recipients, whether or not they are among the authors. This information is collected automatically and retrieved directly from those bibliometric databases.)
TATA, ALESSANDRA; MONTEMURRO, CHIARA; PORCARI, ANDREIA M.; SILVA, KAMILA C.; LOPES DE FARIA, JOSE B.; EBERLIN, MARCOS N.. Spatial distribution of theobromine - a low MW drug - in tissues via matrix-free NALDI-MS imaging. DRUG TESTING AND ANALYSIS, v. 6, n. 9, p. 949-952, . (11/06191-7)
SUDANO, MATEUS J.; SANTOS, VANESSA G.; TATA, ALESSANDRA; FERREIRA, CHRISTINA R.; PASCHOAL, DANIELA M.; MACHADO, RUI; BURATINI, JOSE; EBERLIN, MARCOS N.; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA D. C.. Phosphatidylcholine and Sphingomyelin Profiles Vary in Bos taurus indicus and Bos taurus taurus In Vitro- and In Vivo-Produced Blastocysts. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 87, n. 6, . (11/06191-7, 10/09922-0, 12/02333-4)
PORCARI, ANDREIA M.; FERNANDES, GABRIEL D.; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; SCHWAB, NICOLAS V.; SANTOS, VANESSA G.; ALBERICI, ROSANA M.; GROMOVA, VARVARA A.; EBERLIN, MARCOS N.; LEBEDEV, ALBERT T.; TATA, ALESSANDRA. High throughput MS techniques for caviar lipidomics. ANALYTICAL METHODS, v. 6, n. 8, p. 2436-2443, . (11/06191-7, 12/07206-0)
GARCIA, N. L.; RODRIGUES-MOTTA, M.; BELAZ, K. R. A.; TATA, A.; FRANCA, M. R.; BINELLI, M.; EBERLIN, M. N.. An EM-type approach for classification of bivariate MALDI-MS data and identification of high fertility markers. ENVIRONMETRICS, v. 30, n. 3, . (11/06191-7, 12/07206-0)
SUDANO, MATEUS J.; RASCADO, TATIANA D. S.; TATA, ALESSANDRA; BELAZ, KATIA R. A.; SANTOS, VANESSA G.; VALENTE, RONIELE S.; MESQUITA, FERNANDO S.; FERREIRA, CHRISTINA R.; ARAUJO, JOAO P.; EBERLIN, MARCOS N.; et al. Lipidome signatures in early bovine embryo development. Theriogenology, v. 86, n. 2, p. 472-484, . (11/06191-7, 12/07206-0)
BATAGLION, GIOVANA A.; MARTINS FERREIRA SOUZA, GUSTAVO HENRIQUE; HEERDT, GABRIEL; MORGON, NELSON H.; LISBOA DUTRA, JOSE DIOGO; FREIRE, RICARDO OLIVEIRA; EBERLIN, MARCOS N.; TATA, ALESSANDRA. Separation of glycosidic catiomers by TWIM-MS using CO2 as a drift gas. Journal of Mass Spectrometry, v. 50, n. 2, p. 336-343, . (11/06191-7, 12/21395-0)
TATA, ALESSANDRA; SUDANO, MATEUS J.; SANTOS, VANESSA G.; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA D. C.; FERREIRA, CHRISTINA R.; EBERLIN, MARCOS N.. Optimal single-embryo mass spectrometry fingerprinting. Journal of Mass Spectrometry, v. 48, n. 7, p. 844-849, . (11/06191-7, 12/02333-4)
ZAMPIERI, DAVILA; SANTOS, VANESSA G.; BRAGA, PATRICIA A. C.; FERREIRA, CHRISTINA R.; BALLOTTIN, DANIELA; TASIC, LJUBICA; BASSO, ANDREA C.; SANCHES, BRUNO V.; PONTES, JOSE H. F.; DA SILVA, BARBARA PEREIRA; et al. Microorganisms in cryopreserved semen and culture media used in the in vitro production (IVP) of bovine embryos identified by matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDI-MS). Theriogenology, v. 80, n. 4, p. 337-345, . (11/06191-7)
PITANGUI-MOLINA, CAROLINE P.; VIREQUEA, ALESSANDRA A.; TATA, ALESSANDRA; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; SANTOS, VANESSA G.; FERREIRA, CHRISTINA R.; EBERLIN, MARCOS N.; SILVA-DE-SA, MARCOS FELIPE; FERRIANIA, RUI A.; ROSA-E-SILVA, ANA CAROLINA J. S.. Effect of soybean phosphatidylcholine on lipid profile of bovine oocytes matured in vitro. Chemistry and Physics of Lipids, v. 204, p. 76-84, . (11/06191-7, 12/07206-0)
BELAZ, KATIA ROBERTA A.; TATA, ALESSANDRA; FRANCA, MOANA R.; SANTOS DA SILVA, MARESSA I.; VENDRAMINI, PEDRO HENRIQUE; FERNANDES, ANNA MARIA A. P.; D'ALEXANDRI, FABIO L.; EBERLIN, MARCOS N.; BINELLI, MARIO. Phospholipid Profile and Distribution in the Receptive Oviduct and Uterus During Early Diestrus in Cattle. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 95, n. 6, . (11/03226-4, 11/06191-7, 12/07206-0)
DOS SANTOS, FABIO NEVES; TATA, ALESSANDRA; ANACLETO BELAZ, KATIA ROBERTA; ARGOLO MAGALHAES, DILZE MARIA; MARTINS NEWMAN LUZ, EDNA DORA; EBERLIN, MARCOS NOGUEIRA. Major phytopathogens and strains from cocoa (Theobroma cacao L.) are differentiated by MALDI-MS lipid and/or peptide/protein profiles. ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, v. 409, n. 7, p. 1765-1777, . (11/06191-7, 12/07206-0)
ANNES, KELLY; SUDANO, MATEUS JOSE; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; TATA, ALESSANDRA; SANTOS, VANESSA GONCALVES; DA FONSECA JUNIOR, ALDCEJAM MARTINS; DOS SANTOS, ERIKA CRISTINA; EBERLIN, MARCOS NOGUEIRA; MILAZZOTTO, MARCELLA PECORA. Lipid characterization of in vitro-produced bovine embryos with distinct kinetics of development. ZYGOTE, v. 27, n. 6, p. 413-422, . (11/06191-7, 12/10351-2, 12/07206-0, 13/13199-0)
ANNES, KELLY; SUDANO, MATEUS JOSE; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; TATA, ALESSANDRA; SANTOS, VANESSA GONCALVES; DA FONSECA JUNIOR, ALDCEJAM MARTINS; DOS SANTOS, ERIKA CRISTINA; EBERLIN, MARCOS NOGUEIRA; MILAZZOTTO, MARCELLA PECORA. Lipid characterization of in vitro-produced bovine embryos with distinct kinetics of development. ZYGOTE, v. 27, n. 6, p. 10-pg., . (12/07206-0, 12/10351-2, 11/06191-7, 13/13199-0)