Determinação de fatores que controlam a expressão de Dicer in vivo em C. elegans

Resumo

O envelhecimento aumenta o risco de doenças crônicas, podendo ser retardado pela restrição calórica. Nosso grupo e colaboradores identificaram que, de forma conservada, a síntese de microRNAs diminui com o envelhecimento, sendo revertida pela restrição calórica. Esse fenômeno é decorrente da regulação da expressão de enzimas chave no processamento de microRNAs, principalmente da Dicer, que cliva o pre-miRNA em microRNA maduro. Em mamíferos, esses efeitos são observados apenas no tecido adiposo. Em C. elegans, ainda não se sabe em quais tecidos Dicer é regulada, apesar de se saber que sua expressão diminui com o envelhecimento e aumenta com a restrição calórica. Logo, buscamos identificar, de maneira tecido-específica, como Dicer é regulada em C. elegans nessas situações. Métodos comumente usados têm limitações para responder essas perguntas. PCR em tempo real e Western Blot consideram apenas a expressão total do organismo; enquanto construções extracromossomais de gene reporters podem ser propagadas aleatoriamente nas células e/ou perdidas após gerações. Para superar essas limitações, integraremos ao genoma do C. elegans uma construção em que o gene Dicer, sob o promotor de Dicer, codifica uma proteína fusionada à GFP. Com a análise microscópica validaremos o modelo usando situações que sabidamente modulam Dicer (restrição calórica e envelhecimento). Em seguida, identificaremos em quais tecidos Dicer é mais afetada e testaremos o papel de alguns genes necessários para essa modulação. Esses dados impactariam nosso conhecimento sobre a biologia do envelhecimento, já que poderiam delinear um mecanismo fundamental que determinaria os efeitos da restrição calórica. (AU)