Mutações cooperantes, caracterização funcional e anticorpos contra o mutante do IL7R na leucemia linfóide aguda

Resumo

As leucemias linfóides agudas (LLA) estão amplamente associadas a anormalidades cromossômicas e mutações genéticas recorrentes. Em trabalho recente descrevemos a ocorrência de mutações no exon 6 do gene da cadeia alfa do receptor da IL-7 (IL7Ra), em 9% das LLA de fenótipo T (LLA-T). Algumas alterações genéticas constituem importantes fatores para iniciar a leucemia, mas em muitos casos estas alterações são insuficientes para formar um fenótipo leucêmico completo, sugerindo a ocorrência de mutações oncogênicas colaborativas. Uma das maneiras de identificar possíveis mutações colaborativas é verificar a associação estatística entre as diferentes mutações nos diferentes pacientes. Em nosso estudo, as mutações do IL7Ra apresentaram-se associadas a alterações nos genes HOXA. Outro estudo mostra associação de mutações do IL7Ra com mutações em GATA3 e presença do transcrito quimérico SET-NUP214. Neste projeto propomos o sequenciamento massivo do exoma dos 5 casos portadores do IL7Ra mutante, para identificar outras mutações associadas ao IL7R mutante e estudos funcionais ex vivo para testar colaboração das mutações GATA3 e SET-NUP214 com a mutação no IL7Ra em termos de sobrevivência e proliferação celular. Propõe-se também a obtenção de camundongos Konckin para o IL7Ra mutante (serviço de terceiros) para avaliar o papel dessa mutação na ocorrência 'espontânea' de leucemia e efeitos da mutação na maturação de timócitos. As mutações do IL7Ra resultam na inserção de uma cisteína na porção extracelular justaposta ao domínio transmembrana do receptor. A cisteína 'mutante' contribui para a incomum formação de homodímeros/oligômeros do IL7Ra, sinalização constitutiva via JAK1/STAT5 e indução de sobrevivência e proliferação celular, típico de mutações oncogênicas. No presente projeto pretende-se substrair ou inserir cisteínas da região extracelular do IL7Ra mutante, averiguando formação de dímeros/oligômeros e capacidade de sinalização. Tambpem pretendemos determinar a localização subcelular do IL7Ra mutante e o local da sinalização. Finalmente, uma vez que o IL7R de células normais é um heterodímero do IL7Ra e o IL2Rg, o homodímero IL7Ra-IL7Ra pode servir como alvo leucemia-específico para o desenvolvimento de anticorpos monoclonais (AcM) terapêuticos, fato que será explorado no presente projeto. (AU)