Caracterização da quinase ATR de Leishmania major e de seu papel na sinalização do estresse no processo de replicação do DNA

Resumo

Pouco se sabe sobre a contribuição da quinase ATR na homeostase do genoma de eucariotos primitivos, como os tripanossomatídeos. Em eucariotos superiores a ATR atua na sinalização de estruturas danificadas do DNA principalmente pela fosforilação de Chk1 e consequente parada do ciclo celular. O objetivo central deste projeto é investigar a conservação da quinase ATR em Leishmania e explorar sua contribuição para a sinalização do estresse no processo de replicação do DNA. Os resultados esperados incluem a determinação da distribuição de ATR e seu envolvimento na progressão do ciclo celular em células sob estresse replicativo. Esperamos também analisar o efeito de níveis alterados de ATR (super-expressão ou knock-down) na sinalização do estresse replicativo e na estabilidade do genoma do parasito. O tamanho incomum do gene da ATR (9,6 Kb) limita as possibilidades de manipulação genética do parasito usando estratégias já estabelecidas. Por isso, propomos também o desenvolvimento de uma estratégia que combina os sistemas DiCre-recombinase e CRISPR/cas9 para o nocaute condicional de ATR. (AU)