Identificação de proteínas que interagem com LmRad9, LmHus1 e LmRad1 e geração de linhagem de nocaute condicional para LmHus1

Resumo

As células eucarióticas desenvolveram mecanismos para coordenar a detecção de danos no DNA, a parada do ciclo celular e o reparo dos danos no DNA a fim de preservar a estabilidade genômica. Em eucariotos superiores, o complexo 9-1-1, formado pelas proteínas Rad9, Rad1 e Hus1, participa das etapas iniciais da resposta aos eventos de danos no DNA. Nós identificamos proteínas homólogas de cada uma das três subunidades do complexo 9-1-1 em Leishmania major. Nossos experimentos demonstram que LmRad9 e LmHus1 estão envolvidas na manutenção de telômeros, nas resposta ao estresse genotóxico e controle do ciclo celular, indicando que estas proteínas estão envolvidas em mecanismos de manutenção da estabilidade genômica neste parasita. Nós também demonstramos que LmHus1 e LmRad9 se apresentam na forma de complexos e interagem entre si in vivo. Isto sugere que o complexo 9-1-1 tenha sido conservado neste parasita. Entretanto, nós também observamos que as subunidades do complexo 9-1-1 em L. major apresentam divergência da estrutura primária e terciária predita, em relação às proteínas homólogas em outros eucariotos, e por isso nós gostaríamos de entender as consequências biológicas destas características. Leishmania apresenta pronunciada plasticidade genômica e explora esta habilidade não apenas no controle da expressão gênica, mas provavelmente também no progresso da infecção. A divergência estrutural do complexo 9-1-1 pode estar relacionada à plasticidade genômica deste parasita. Portanto, elucidar a estrutura e função do complexo 9-1-1 é uma tarefa indispensável para o entendimento da evolução desta maquinaria nas células eucarióticas. Além disso, este conhecimento pode ser útil para a elucidação das estratégias exploradas por este parasita no estabelecimento da infecção. (AU)