Identificação de proteínas que interagem com LmRad9, LmHus1 e LmRad1 e geração de linhagem de nocaute condicional para LmHus1

• Processo: 14/00751-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Luiz Ricardo Orsini Tosi
• Beneficiário: Jeziel Dener Damasceno
• Supervisor: Richard McCulloch
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Glasgow, Escócia
• Vinculado à bolsa: 13/00570-1 - Caracterização do possível complexo 9-1-1 de Leishmania major, BP.PD
• Assunto(s): Biologia molecular Leishmania Ciclo celular Reparo do DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ciclo celular | Complexo 9-1-1 | Hus1 | leishmania | Plasticidade genômica | Rad1 | Rad9 | reparo de DNA | Biologia Molecular de Leishmania

Resumo

As células eucarióticas desenvolveram mecanismos para coordenar a detecção de danos no DNA, a parada do ciclo celular e o reparo dos danos no DNA a fim de preservar a estabilidade genômica. Em eucariotos superiores, o complexo 9-1-1, formado pelas proteínas Rad9, Rad1 e Hus1, participa das etapas iniciais da resposta aos eventos de danos no DNA. Nós identificamos proteínas homólogas de cada uma das três subunidades do complexo 9-1-1 em Leishmania major. Nossos experimentos demonstram que LmRad9 e LmHus1 estão envolvidas na manutenção de telômeros, nas resposta ao estresse genotóxico e controle do ciclo celular, indicando que estas proteínas estão envolvidas em mecanismos de manutenção da estabilidade genômica neste parasita. Nós também demonstramos que LmHus1 e LmRad9 se apresentam na forma de complexos e interagem entre si in vivo. Isto sugere que o complexo 9-1-1 tenha sido conservado neste parasita. Entretanto, nós também observamos que as subunidades do complexo 9-1-1 em L. major apresentam divergência da estrutura primária e terciária predita, em relação às proteínas homólogas em outros eucariotos, e por isso nós gostaríamos de entender as consequências biológicas destas características. Leishmania apresenta pronunciada plasticidade genômica e explora esta habilidade não apenas no controle da expressão gênica, mas provavelmente também no progresso da infecção. A divergência estrutural do complexo 9-1-1 pode estar relacionada à plasticidade genômica deste parasita. Portanto, elucidar a estrutura e função do complexo 9-1-1 é uma tarefa indispensável para o entendimento da evolução desta maquinaria nas células eucarióticas. Além disso, este conhecimento pode ser útil para a elucidação das estratégias exploradas por este parasita no estabelecimento da infecção. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CARNIELLI, JULIANA B. T.; CROUCH, KATHRYN; FORRESTER, SARAH; SILVA, VLADIMIR COSTA; CARVALHO, SILVIO F. G.; DAMASCENO, JEZIEL D.; BROWN, ELAINE; DICKENS, NICHOLAS J.; COSTA, DORCAS L.; COSTA, CARLOS H. N.; et al. A Leishmania infantum genetic marker associated with miltefosine treatment failure for visceral leishmaniasis. EBIOMEDICINE, v. 36, p. 83-91, OCT 2018. (14/00751-9)

DAMASCENO, JEZIEL D.; OBONAGA, RICARDO; SANTOS, ELAINE V.; SCOTT, ALAN; MCCULLOCH, RICHARD; TOSI, LUIZ R. O.. Functional compartmentalization of Rad9 and Hus1 reveals diverse assembly of the 9-1-1 complex components during the DNA damage response in Leishmania. Molecular Microbiology, v. 101, n. 6, p. 1054-1068, SEP 2016. (13/00570-1, 14/00751-9, 13/26806-1, 14/06824-8, 09/54014-7)

DAMASCENO, JEZIEL D.; OBONAGA, RICARDO; SILVA, GABRIEL L. A.; REIS-CUNHA, JOAO L.; DUNCAN, SAMUEL M.; BARTHOLOMEU, DANIELLA C.; MOTTRAM, JEREMY C.; MCCULLOCH, RICHARD; TOSI, LUIZ R. O.. Conditional genome engineering reveals canonical and divergent roles for the Hus1 component of the 9-1-1 complex in the maintenance of the plastic genome of Leishmania. Nucleic Acids Research, v. 46, n. 22, p. 11835-11846, DEC 14 2018. (14/00751-9, 17/07092-9, 14/06824-8, 13/00570-1, 16/16454-9, 16/50050-2)

SANTOS, RENATO E. R. S.; SILVA, GABRIEL L. A.; SANTOS, ELAINE V.; DUNCAN, SAMUEL M.; MOTTRAM, JEREMY C.; DAMASCENO, JEZIEL D.; TOSI, LUIZ R. O.. A DiCre recombinase-based system for inducible expression in Leishmania major. Molecular and Biochemical Parasitology, v. 216, p. 45-48, SEP 2017. (04/08868-0, 14/00751-9, 13/26806-1, 14/06824-8, 13/00570-1, 09/54014-7)