Caracterização do possível complexo 9-1-1 de Leishmania major

Resumo

LmHus1 é uma proteína nuclear de Leishmania major que está envolvida em eventos de reconhecimento e reparo de DNA . Os homólogos desta proteína em outros eucariotos, juntamente com as proteínas Rad9 e Rad1, fazem parte do complexo heterotrimérico 9-1-1, que atua nos estágios iniciais de reconhecimento e reparo de danos no DNA. Em nossas buscas pelos possíveis parceiros de LmHus1 na formação do complexo 9-1-1 de L. major, não encontramos nenhum possível homólogo para proteína Rad1. Entretanto, encontramos uma possível proteína homóloga de Rad9. Nossos experimentos demonstram que LmRad9 localiza-se no núcleo e afeta a resposta do parasito a drogas genotóxicas, indicando seu envolvimento na resposta a danos no DNA. É importante ressaltar também que suas características estruturais sugerem que LmRad9 possa desempenhar ambas funções de Rad9 e Rad1. De fato, experimentos de co-imunopreciptação demonstram que LmRad9 interage com LmHus1, indicando a existência de um complexo entre estas duas proteínas. Sendo assim, o interesse de nossa proposta é caracterizar o possível complexo 9-1-1 de L. major, formado pelas proteínas LmHus1 e LmRad9. Para isto, pretendemos investigar a massa molar nativa deste complexo, a estequiometria com que interagem e também o arranjo das mesmas no contexto do complexo. Acreditamos que os dados gerados com estas análises possam contribuir para a compreensão dos mecanismos que responsáveis pela plasticidade genômica deste parasito.