Caracterização da proteína LmRad1 de Leishmania major e estudo de seu papel na sinalização de danos no DNA

Resumo

O parasita protozoário Leishmania apresenta um genoma dinâmico e plástico onde a amplificação gênica e a translocação de sequencias são fenômenos relativamente comuns. Os processos moleculares que baseiam estes fenômenos geram estruturas de DNA que podem ser reconhecidas como DNA danificado. Em eucariotos superiores, o sistema de controle checkpoint reconhecem estas estruturas alteradas e bloqueiam a progressão do ciclo celular, permitindo o reparo ao dano na molécula de DNA. Em mamíferos e leveduras, o complexo heterotrimérico formado pelas proteínas Rad9, Hus1 e Rad1 (9-1-1) participa na etapa inicial de reconhecimento e sinalização do estresse replicativo. Publicamos recentemente a caracterização das proteínas de Leishmania major LmHus1 e LmRad9. Demonstramos nestes artigos as semelhanças estruturais e filogenéticas das proteínas LmHus1 e LmRad9 com as subunidades do complexo 9-1-1 de outros eucariotos. Neste cenário, o objetivo desta proposta é investigar a existência da proteína faltante, homóloga de Rad1, no contexto de um possível complexo 9-1-1 em L. major. Para isso, pretendemos investigar a expressão de um possível homólogo de Rad1 e estudar seu papel na resposta a danos no DNA. Vamos gerar linhagens que superexpressam o gene, além de linhagens nocaute. A localização subcelular da proteína e sua interação com as proteínas já caracterizadas LmHus1 e LmRad9 também serão investigadas. (AU)