Caracterização das proteínas LmRad9 e LmRad1 na resposta a danos no DNA de Leishmania major

Resumo

Nosso laboratório estuda a existência e a função do complexo proteico 9-1-1 (Rad9-Rad1-Hus1) nos mecanismos de resposta a danos no DNA (DDR) do protozoário parasito Leishmania. Em outros eucariotos, este complexo atua na detecção de danos ao DNA e na sinalização de parada no ciclo celular para o reparo adequado da molécula de DNA. Demonstramos que a proteína homóloga de Hus1 no parasito participa na DDR e interage in vivo com LmRad9. As duas proteínas LmHus1 e LmRad9 ainda participam na manutenção de telômeros. Verificamos que a deficiência de LmHus1 prejudica a ativação do checkpoint em resposta ao estresse replicativo. Demonstramos também que LmHus1 é conservada na linhagem eucariótica, enquanto que LmRad9 apresenta uma baixa conservação. Além disso, o genoma do parasito parece não codificar um gene homólogo a Rad1. Estes dados sugerem um mecanismo peculiar de detecção e sinalização de danos no DNA. O estudo deste complexo em Leishmania deverá contribuir não apenas para o entendimento da homeostase genômica do parasito, mas também da evolução da DDR em eucariotos. Desta forma, o objetivo geral desta proposta é (i) identificar o possível gene homólogo de Rad1 em L. major; (ii) estudar a expressão e função de seu produto; (iii) investigar a arquitetura do possível complexo 9-1-1 do parasito; e (iv) ampliar a caracterização funcional das proteínas LmHus1 e LmRad9. (AU)