De estudos funcionais à busca de novos inibidores anticâncer: explorando cinases reguladores do ciclo celular da família de NEK humana

Resumo

Membros da família de NEK cinases (NIMA related kinases) foram identificados como importantes reguladores de pontos de checagem do ciclo celular, especialmente na transição G2 para M. Apesar de ser uma das famílias de cinases menos estudadas, recentes estudos mostraram que elas podem ter papéis crucias na mitose, separação dos centrômeros e em vias de sinalização de danos de DNA. Essas características junto ao o fato de que vários membros da família serem superexpressos em câncer ou apresentam elevadas taxas de mutação tornam elas interessantes candidatas alvos no diagnóstico e na terapia do câncer. Entretanto, não se conhecem ainda para nenhuma NEK os substratos fisiológicos e também não quais são as consequências funcionais de mutações pontuais frequentes (trocas de aminoácidos) que ocorrem nos seus genes em câncer. Para tanto o objetivo central deste projeto é descrever o papel funcional das NEKs humanas em células normais e tumorais. Usaremos a abordagem de "Shokat" para a geração de cinases que reconhecem análogos de ATP para a identificação de substratos fisiológicos in vivo. Numa segunda linha introduzimos mutações que ocorrem em câncer e para analisar mudanças funcionas das duas cinases in vivo e in vitro. Analisaremos ainda o perfil da expressão proteica destas NEKs em tecidos normais e tumorais e realizaremos triagens de compostos in vitro pelo método "Bioensaio High Throughput Screening", baseado na tecnologia de um ensaio acoplado que usa luciferase para detectar o consumo de ATP da cinase, desenvolvido previamente no grupo. Dessa forma, o projeto visa esclarecer o papel fisiológico das NEK 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8 e 10 e as alterações funcionais das mesmas que ocorrem em câncer. Em conjunto o projeto contribuirá para análise dos potenciais dessas proteínas cinases como alvos terapêuticos no tratamento do câncer e visam a obtenção de novos inibidores específicos dessas cinases. (AU)